Czystość metodą HPLC
Ostatnia aktualizacja
Wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC) jest standardem branżowym w pomiarze czystości peptydów. Gdy dla peptydu podano procentową czystość metodą HPLC, wartość ta powinna pochodzić z kalibrowanego systemu HPLC, zwykle z użyciem kolumny z odwróconą fazą C18 i detektora UV przy 214 nm lub 220 nm. Każdy pik na chromatogramie odpowiada odrębnej formie molekularnej; pole powierzchni pod pikiem docelowym, wyrażone jako procent całkowitego pola pików, stanowi wartość czystości. W przypadku peptydów badawczych bardzo wysokie wartości czystości należy nadal rozpatrywać łącznie z wszelkimi dodatkowymi badaniami serii, które faktycznie wykonano, nie traktując czystości jako dowodu tożsamości molekularnej. Wybór długości fali detekcji UV ma znaczenie: 214 nm rejestruje bezpośrednio absorpcję wiązania peptydowego i jest najbardziej uniwersalnym ustawieniem dla peptydów; 220 nm bywa stosowane w celu tłumienia szumu fazy ruchomej, ale zaniża absorbancję dla peptydów pozbawionych reszt aromatycznych. Gradientowa HPLC (zmiana składu fazy ruchomej w czasie) rozdziela blisko spokrewnione formy - sekwencje skrócone o jedną resztę, warianty utlenione, reszty zracemizowane - które w warunkach izokratycznych współeluowałyby. Pełny raport czystości na certyfikacie analizy powinien zawierać typ kolumny, fazę ruchomą, program gradientu, natężenie przepływu, długość fali detekcji, czas retencji piku docelowego oraz kopię samego chromatogramu. Przejrzenie ich wszystkich to jedyny sposób, aby zrozumieć, co podana wartość czystości oznacza dla danej serii. Peptra Labs zapisuje te parametry w dostępnych informacjach COA dla kwalifikujących się serii.
Powiązane
- Peptyd
- Certyfikat analizy (COA)
- Spektrometria mas (MS)
Ostatnia aktualizacja: 4 maja 2026